人LDH-B基因克隆及其真核表达载体的构建

作者：胡湘麟; 卿鑫; 曾凡才

来源：现代医药卫生, 2016, 32(20): 3106-3112.

• L-乳酸脱氢酶
• 基因
• 克隆,分子
• 遗传载体
• 真核细胞

目的克隆人乳酸脱氢酶B(LDH-B)基因并构建其真核表达载体。方法提取人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的总RNA,逆转录生成c DNA,以c DNA为模板,采用PCR扩增获得LDH-B基因编码区序列片段,限制性核酸内切酶Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切LDH-B基因片段及p UC19质粒,连接反应构建p UC19-LDH-B克隆载体,并将其转入大肠埃希菌DH5α感受态细胞,蓝白筛选挑取白色菌落,酶切验证后测序鉴定。将序列正确的LDH-B基因亚克隆到pc DNA3.1(-)载体上,构建LDH-B真核表达载体pc DNA3.1(-)-LDH-B。结果PCR扩增后可见约1.0 kb的特异性条带,与预期的LDH-B片段长度相符合;Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切p UC19-LDH-B后可见约2.6 kb和1.0 kb的条带,分别与p UC19和LDH-B的片段长度相符合,LDH-B测序结果与DNA序列数据库(Genebank)中的参考序列相一致;Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切pc DNA3.1(-)-LDH-B后可见约5.5 kb和1.0 kb的条带,分别与pc DNA3.1(-)和LDH-B的片段长度相符合。结论成功克隆了人LDH-B基因,并构建了其真核表达载体,为进一步探究LDH-B的生物学功能奠定了基础。

• 单位
  西南医科大学