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摘要
旨在制备鸡细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的特异性单克隆抗体，为家禽免疫检查点和疫苗研发提供有益制剂。利用杆状病毒表达系统体外表达鸡的CTLA-4蛋白，以其为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠，经B淋巴细胞融合技术制备、筛选出针对鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体。通过间接免疫荧光、蛋白免疫印迹、流式细胞术等方法分析抗CTLA-4单克隆抗体的生物学特性。结果显示：构建了在Sf9昆虫细胞中表达CTLA-4蛋白的重组杆状病毒，成功筛选出3株能稳定分泌抗鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体，分别命名为：mAb-CTLA4-3D7、mAb-CTLA4-5A4、mAb-CTLA4-6A12。亚类鉴定表明，mAb-CTLA4-3D7为IgG2a, Lambda链；mAb-CTLA4-5A4为IgG3,Kappa链；mAb-CTLA4-6A12为IgG2a, Kappa链。3株单克隆抗体均能与转染真核表达质粒pCAGGS-CTLA-4-Flag的DF-1细胞和感染重组杆状病毒rBac-CTLA-4的Sf9昆虫细胞反应。单克隆抗体mAb-CTLA4-3D7与鸡的PBMC有较好的结合活性，且能与CD3+T淋巴细胞结合，结合率约为16%。本研究首次成功制备了抗鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体，并分析了其反应活性及生物学特性，为免疫检查点在禽病的发病机制、信号通路、疫苗研发等研究领域提供了材料。
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