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摘要
目的 探讨外膜蛋白C(outer membrane protein C,OmpC)作为蛋白呈递平台将抗原定位至细菌外膜囊泡（outer membrane vesicle,OMV）表面的可行性。方法 构建含有ompC基因片段及金黄色葡萄球菌EsxA抗原基因（esxA基因）的重组表达质粒，转化感受态E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达，表达产物进行12%SDS-PAGE分析。提取重组菌OMV，经12%SDS-PAGE分析OMV总蛋白，并采用Western blot法和纳米流式仪检测融合蛋白定位至OMV表面的情况。结果 含ompC基因和esxA基因的重组表达质粒经测序证明构建正确。融合蛋白OmpC-EsxA经12%SDS-PAGE分析，可见相对分子质量约57 000的目的蛋白条带，大小与预期相符。OMV总蛋白经12%SDS-PAGE分析，可见多条蛋白条带，表明成功提取重组菌OMV。重组菌OMV表面的融合蛋白OmpC-EsxA可与小鼠抗His-Tag抗体发生特异性结合，且纳米流式仪可检测到荧光抗体标记的OMV。结论 OmpC可作为蛋白呈递平台将抗原定位至OMV表面，有望应用于抗原呈递疫苗的研发。
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