内质网应激关键因子PREK在应力加载下成肌细胞凋亡中的作用及机制

作者：嵇国平; 田一弘; 刘美希; 沈莹; 沈刚^*

来源：上海口腔医学, 2019, 28(03): 259-263.

DOI：10.19439/j.sjos.2019.03.007

• PERK
• 周期性应力
• 内质网应激
• 成肌细胞凋亡

目的:研究周期性张应力对L6大鼠成肌细胞凋亡的影响,探讨蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase Rlike ER kinase,PERK)在这一过程中的作用及机制。方法:构建L6细胞力学刺激模型,加载参数为细胞拉伸形变率15%,频率10个循环/min,每循环包括3 s拉伸及3 s舒张,加力时间为2、6、12、24 h,以不加力组为对照组。应用DAPI染色观察各组细胞凋亡情况;应用实时荧光定量PCR检测各组PERK、CHOP mRNA的表达;应用Western免疫印迹检测各组PERK、p-PERK的表达变化。加入PERK抑制剂后重复实验,检测各组细胞凋亡情况,PERK、CHOP mRNA的表达变化及p-PERK的蛋白表达变化。采用SPSS17.0软件包进行统计学分析。结果:DAPI染色显示,L6大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生凋亡,24 h时达到凋亡最大值。PERK被抑制后,加力组的细胞凋亡程度与对照组无显著差别。RT-PCR结果显示,随着加力时间的延长,CHOP mRNA的表达逐渐增加;PERK mRNA表达无差异。Western免疫印迹结果显示,p-PERK蛋白表达水平随加力时间延长而逐渐升高,总蛋白PERK的表达无明显变化;加入PERK抑制剂后,CHOP的mRNA表达与对照组无显著差异,p-PERK蛋白表达与对照组无显著差异。结论:内质网应激关键因子PERK参与了周期性应力条件下的成肌细胞凋亡,其作用机制可能与PERK磷酸化有关。

• 单位
  青岛大学附属医院