单纯疱疹病毒2型抗原DNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

作者：许晓群; 徐辉; 游力; 张建; 张彩; 魏海明

来源：中国麻风皮肤病杂志, 2004, (04): 320-322.

• 单纯疱疹病毒2型
• 克隆
• 表达
• 大肠杆菌

目的 :　在大肠杆菌中表达重组单纯疱疹病毒 2型 (HSV - 2 )抗原。方法 :　用PCR方法从单纯疱疹病毒中扩增HSV - 2DNA片段 ,约 5 0 0bp ,克隆到pMD18T载体并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRI和BamHI消化pMD18T HSV - 2重组质粒 ,分离HSV - 2片段 ,并插入质粒表达载体pBV2 2 0的相应限制酶位点 ,酶谱分析鉴定重组表达载体pBV2 2 0 HSV - 2。转化菌株经 4 2℃诱导 ,用SDS-PAGE和Westernblot鉴定表达的重组蛋白。结果 :　PCR扩增的DNA片段与HSV - 2的目的片段大小一致。重组质粒pMD18T HSV - 2的DNA序列分析显示克隆的DNA序列与文献报道的HSV - 2DNA序列一致。SDS -PAGE表明重组蛋白相对分子量为 180 0 0 ,表达量达菌体总蛋白的 2 0 %左右 ,Westernblot分析显示重组蛋白能特异地与抗HSV - 2抗体结合。结论 :　已成功构建了表达具有功能的重组HSV - 2抗原的工程菌株

• 单位
  山东省医学科学院基础医学研究所; 中国科技大学; 生命学院; 齐鲁工业大学