结核分枝杆菌转座突变库的建立及应用

作者：谢宇晴; 沈也驰; 李昕; 徐正中; 焦新安^*; 陈祥^*

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2022, 43(03): 34-39.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2022.03.005

• ΦMycoMarT7噬菌体
• Himar1转座子
• 转座突变库
• 结核分枝杆菌生物被膜

为利用转座突变技术构建结核分枝杆菌H37Ra转座突变库，优化转座突变构建流程，并应用其筛选与生物被膜形成和抗胁迫有关的基因。利用耻垢分枝杆菌大量富集温敏型ΦMycoMarT7噬菌体，转导H37Ra,建立结核分枝杆菌转座突变库，突变库容量约3.58×104 CFU·mL-1,转导效率为7.96×10-6。使用Sauton培养基对突变体进行筛选，观察突变体的生物被膜形成能力，获得8株生物被膜形成缺陷的突变株，经全基因组测序定位，其中1个突变基因为Rv3099c。构建表达该基因的重组质粒，将重组质粒导入耻垢分枝杆菌中。与导入空质粒的对照组相比，导入重组质粒的耻垢分枝杆菌生物被膜形成能力明显增强，但抗温度胁迫及SDS胁迫能力并无增强，明确Rv3099c与结核分枝杆菌生物被膜形成能力相关。

• 单位
  扬州大学; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心