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摘要
新型冠状病毒感染人体后可引起发热、咳嗽等呼吸道症状，重症者可发生新型冠状病毒肺炎、严重急性呼吸综合征、甚至死亡。因此，快速、准确的识别新冠病毒的感染者，对于阻止病毒的持续传播非常重要。目前，新冠病毒抗原检测试剂产品大多以单个新冠病毒的N蛋白为目标抗原，存在一定的假阴性情况，本研究使用可识别多个新冠病毒结构蛋白抗原表位的多抗建立了一种双抗夹心ELISA方法，有望提高新冠病毒抗原检测的敏感性。利用课题组前期设计的一种新冠病毒抗原表位融合蛋白作为免疫原，搭配弗氏佐剂免疫新西兰大白兔，分析兔血清抗体的分泌情况及效价。利用制备的兔源多抗作为捕获抗体，以HRP标记的兔源多抗作为酶标抗体，建立一种用于检测新冠病毒抗原的双抗夹心ELISA检测方法。分别确定最佳捕获抗体、酶标抗体的稀释度以及最佳封闭液种类、封闭时间，初步评价方法的灵敏度和特异性，并比较不同样品储存条件对该ELISA方法检测效果的影响。新冠病毒抗原表位融合蛋白免疫兔后产生了高效价的特异性抗体，经纯化获得了相应的多抗。所建立的双抗夹心ELISA方法具有较好的检测限和线性范围，与常见的呼吸道病原体无交叉反应，有望用于新冠病毒的抗原检测。
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单位南京市疾病预防控制中心; 中国药科大学
