人可溶性sTNFR1及胞膜外区Ig融合基因重组腺病毒的真核表达及功能活性鉴定

作者：马佳佳; NickLu; 陈必良

来源：中国药理学通报, 2013, (08): 1098-1103.

• 人可溶性TNF受体1
• 免疫球蛋白G
• 哮喘
• 妊娠
• 腺病毒
• 真核表达 human soluble TNF receptor 1
• immunoglobulin G
• asthma
• pregnancy
• adenovirus
• eukaryotic expression

目的构建携带人sTNFR1与IgGFc片段融合基因的重组腺病毒,稳定表达并初步鉴定其功能活性在妊娠哮喘炎症机制中的作用。方法将PCR扩增的sTNFR1及IgGFc基因片段先后连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV多克隆位点上,酶切线性化后在BJ5183细菌内与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,产生获得的AdE-EGFP-sTNFR1-Ig以脂质体法转染AD293细胞进行病毒包装,以绿色荧光蛋白(GFP)监测病毒滴度及感染效率。RT-PCR、Western blot实验鉴定细胞内重组腺病毒转录及融合基因与蛋白表达;流式细胞术、ELISA实验分析混合培养上清中转染肥大细胞(MC)激活、调节同基因...

• 单位
  NorthWestern University; 第四军医大学; 西京医院