产脂肪酶重组菌SRI-01随机突变及诱导表达条件的研究

作者：尹金凤; 李泓全; 吴欣森^*

来源：中国酿造, 2018, 37(08): 56-61.

• 产脂肪酶重组菌
• 随机突变
• 诱导表达
• 脂肪酶活力
• 条件优化

采用大引物全质粒法(MEGAWHOP)随机突变,快速有效地对研究室前期构建的一株脂肪酶重组菌株SRI-01进行分子改造,通过对易错聚合酶链反应(ep-PCR)获得的2 300个突变株进行96孔板高通量筛选,得到一株优良突变株SRM08。通过单因素试验,优化诱导前的菌体生物量、诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度、Ca Cl2的浓度、诱导温度。通过比较3种不同破碎缓冲液浓度和缓冲液p H对脂肪酶活力的影响,选择最优的破碎缓冲液。确定突变株SRM08最佳诱导表达条件为菌液生物量OD600 nm值为0.7,IPTG的浓度为0.1 mmol/L,Ca Cl2浓度为4 mmol/L,诱导温度为25℃,采用5 mmol/L磷酸钠缓冲液为破碎缓冲液,p H值为7.0。在此优化条件下,脂肪酶活达到88 508 U/L,为原重组菌株SRI-01的2.84倍。

• 单位
  上海化工研究院有限公司