Drop-off微滴式数字PCR检测急性髓系白血病NRAS基因突变及其临床应用

作者：向鹤麟; 金晔; 袁倩; 姚冬明; 李婷; 于迪; 冷加燕; 林江; 钱军^*

来源：江苏大学学报(医学版), 2023, 33(01): 49-53.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y220165

• drop-off微滴式数字PCR
• NRAS基因
• 急性髓系白血病
• 基因突变
• 微小残留病灶
• 预后

目的:建立检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物(NRAS)基因突变的drop-off微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法，并评价该方法的临床应用价值。方法:针对NRAS G12和G13突变位点设计特异性drop-off ddPCR引物和探针，建立最佳反应体系，并对该方法进行性能验证。应用该方法对140例临床样本进行初筛，其检测结果与Sanger测序进行比较，并用二代测序(next generation sequencing, NGS)进行验证。结果:建立drop-off ddPCR检测NRAS基因G12/G13突变的方法，灵敏度达0.158%,重复性、线性良好，其空白限为5.40拷贝数/μL,最低检测下限为15.84拷贝数/μL。在140例初诊AML患者中，drop-off ddPCR检出NRAS突变28例(20%),其突变负荷为0.26%～52.85%(中位2.14%);而Sanger测序仅检出7例(5%)阳性，为进一步验证，将21例Sanger测序结果阴性而drop-off ddPCR检测阳性的样本进行NRAS基因NGS,检出14例阳性，而另外7例NGS阴性的样本，其drop-off ddPCR检测突变频率为0.53%～1.50%(中位1.10%)。结论:建立了drop-off ddPCR技术检测AML患者中NRAS基因突变的方法，该方法灵敏度高，可用于对NRAS基因G12/G13突变进行定量检测，有望可用于AML患者预后判断和疾病监测。

• 单位
  江苏大学附属人民医院; 中心实验室