CRISPR/Cas9技术敲减Ku80基因对人乳头状甲状腺癌细胞生物学功能的影响

作者：范亚莉; 王娟红^*; 魏威; 方航荣; 段瑛; 李娜苗; 张莹莹; 李建英

来源：山西医科大学学报, 2018, 49(10): 1184-1191.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2018.10.009

• Ku80
• 甲状腺乳头状癌
• CRISPR/Cas9

目的探讨Ku80基因敲减对人乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞功能的影响。方法采用real time PCR方法检测Ku80在PTC癌细胞株K1、B-CPAP中m RNA的表达水平;以PTC癌细胞株K1、B-CPAP为研究对象,分为KO(Knockout)组(慢病毒感染Ku80)、NC组(慢病毒感染Ku80无关序列)和MOCK组(未进行病毒感染)。应用CRISPR/Cas9(一种能够对任何物种基因组的特定位点进行精确编辑的技术)行Ku80基因敲减,采用MTT、Transwell、克隆形成、流式细胞等实验方法检测Ku80敲减对癌细胞增殖、侵袭、克隆形成能力及凋亡等生物学功能的影响。结果 RT-PCR结果证实Ku80基因在2株乳头状甲状腺癌细胞中均高表达。CRISPR/Cas9技术Ku80敲除效率分别为95. 6%和56%。与NC组相比较,K1细胞中KO组细胞增殖活力、侵袭及克隆形成能力均显著降低,而细胞凋亡率明显上升(P <0. 05);与NC组相比较,BCPAP细胞中KO组细胞增殖活力及侵袭力均呈下降趋势,但无统计学差异(P> 0. 05);克隆形成能力显著降低,细胞凋亡数增加(P <0. 05)。结论 Ku80基因敲减促进乳头状甲状腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖、侵袭。

• 单位
  西安市第三医院; 延安大学; 西安市中心医院