牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

作者：韩猛立; 何延华; 黄新; 宋天增; 薄新文; 钟发刚

来源：中国兽医科学, 2010, 40(09): 953-958.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2010.09.013

• SYBR GreenⅠ
• 实时荧光定量聚合酶链反应
• 牛
• CD80
• CD86

根据GenBank中牛CD80和CD86基因的序列,在保守区设计并合成各自的特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立一种检测牛共刺激分子CD80和CD86的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。将CD80基因和CD86基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明,CD80基因、CD86基因和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×108 copies/μL范围均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。证实,所建立的牛共刺激分子CD80和CD86荧光定量RT-PCR检测方法适用于临床样品的检测。

• 单位
  新疆生产建设兵团; 石河子大学; 动物科技学院