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摘要
目的 探讨免疫检查点程序性死亡受体-1(PD-1)/PDL1通路在脑型疟(CM)中的作用，研究人为强化CD8+T细胞PD-1/PDL1通路对小鼠CM模型的保护性作用。方法 建立小鼠实验型脑型疟(ECM)模型，对其脑组织切片进行HE染色和免疫荧光染色，评价ECM小鼠脑部病理变化；分离ECM小鼠脾脏CD8+T细胞，流式细胞术检测其PD-1分子表达，评价脾脏CD8+T细胞活化情况；对ECM小鼠脾脏CD8+T细胞进行羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色，评价其增殖情况；分离小鼠原代脑血管内皮细胞(BMECs)，添加γ干扰素(IFN-γ)和感染疟原虫的红细胞活化BMECs，建立CD8+T细胞-BMECs共孵育模型，模拟ECM小鼠脑部免疫微环境，使用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评价活化的脾脏CD8+T细胞对BMECs的杀伤效果；利用CD8+T细胞-BMECs共孵育模型和小鼠脑组织切片免疫荧光实验，检测BMECs、小胶质细胞、星形胶质细胞的PDL1表达情况；体外表达具有生物学活性的PDL1-IgG1Fc融合蛋白和IgG1Fc对照蛋白；使用PDL1-IgG1Fc融合蛋白干预ECM小鼠，通过记录小鼠存活时间、检测血清细胞因子含量、以及CD8+T细胞-BMECs共孵育模型，评价PDL1-IgG1Fc融合蛋白降低CD8+T细胞过度活化状态，降低脑型疟症状的作用。结果 ECM小鼠脑部血脑屏障开放，CD8+T细胞浸润至脑实质，且部分CD8+T细胞与神经元存在“共定位”现象，ECM小鼠脾脏CD8+T细胞PD-1表达水平上调，活化增殖程度升高；CD8+T细胞-BMECs共孵育模型证实，活化的CD8+T细胞可有效杀伤BMECs，导致BBB开放和中枢神经系统损伤；CD8+T细胞-BMECs共孵育模型表明，脑部免疫微环境可诱导内皮细胞高表达PDL1分子，脑组织切片免疫荧光实验也证实ECM小鼠的小胶质细胞和星形胶质细胞高表达PDL1分子；与IgG1Fc对照蛋白相比，PDL1-IgG1Fc融合蛋白干预ECM小鼠，可抑制其CD8+T细胞过度活化以及对BMECs的杀伤功能，缓解ECM小鼠体内过度炎症水平并显著降低ECM的发生率和死亡率。结论 PD-1/PDL1信号通路在CM发病过程中发挥重要作用，PDL1-IgG1Fc融合蛋白可有效降低CD8+T细胞的过度活化程度，对于维持宿主免疫平衡具有积极作用，是一个有前景的以过度活化的CD8+T细胞为靶点的CM免疫辅助治疗手段。
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单位基础医学院; 中国人民解放军空军军医大学
