人精子RNA的提取及含量分析

作者：李红钢; 周慧; 官黄涛; 丁晓芳; 熊承良

来源：生殖医学杂志, 2008, 17(02): 104-108.

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2008.02.006

• 精子
• RNA
• 精子特异性阳离子通道2
• 鱼精蛋白2

目的建立可靠的提取人精子RNA的方法,分析其含量并用于检测基因mRNA。方法9例正常精液标本液化后,经Percoll纯化,用体细胞裂解液(含0.1%十二烷基硫酸钠和0.5%Triton X-100的水溶液)于0℃处理15 min去除精子以外的细胞。用RNeasy Kit提取精子RNA,微量核酸测定仪测定RNA量。RNA用于逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测β-Actin、精子特异性阳离子通道2(CatSper2)、鱼精蛋白2(Protamine-2)mRNA,同时,检测c-Kit、CD4、上皮细胞钙粘蛋白(E-Cad-herin)mRNA,分别排除生精细胞、白细胞和上皮细胞的污染。结果体细胞裂解液于0℃处理15 min能去除精子以外的细胞,使精子RNA提取量提高(2.2~4.9倍)。9例正常精液标本RNA量为(233.5±75.3)ng/106精子。所有标本RNA用RT-PCR,均成功扩增β-Actin、CatSper2、Protamine-2,但扩增c-Kit、CD4、E-Cadherin未见目的条带。结论人精子中含微量RNA,本提取方法能提取人精子中微量RNA,且避免其他细胞污染,可供人精子RNA研究和临床检测选用。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院