微小RNA-22通过靶向调控异黏蛋白表达影响骨肉瘤细胞化疗敏感性

作者：孙亮; 郭世炳^*; 娜日松; 赵振群; 赵伟; 王玉鑫

来源：中华实验外科杂志, 2019, 36(11).

• 骨肉瘤
• 化疗敏感性
• 微小RNA-22

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-22通过靶向调控异黏蛋白(MTDH)表达影响骨肉瘤细胞化疗敏感性。方法通过体外培养骨肉瘤细胞株MG-63进行实验研究, 利用噻唑蓝(MTT)法检测MG-63细胞增殖的变化, 定量聚合酶链反应(PCR)法检测MTDH的mRNA表达变化, 蛋白质印迹法(Western blot)定量检测MTDH的蛋白表达。荧光素酶报告检测MTDH是否为miR-22的直接靶点, Western blot和定量PCR检测miR-22过表达和抑制时MTDH表达变化。单因素方差分析比较多组间差异, t检验比较两组间差异。结果 (1)MTT法结果表明顺铂可抑制MG-63细胞增殖, 而加入miR-22协同顺铂抑制MG-63细胞增殖的更加明显(F=841.919, P<0.01)。(2)顺铂可促进MG-63细胞中MTDH的表达(t=20.430, P<0.01), miR-22过表达可以减弱顺铂对MTDH表达的促进作用(t=11.570, P<0.01)。miR-22过表达时, MTDH mRNA表达明显减低(t=9.532, P<0.01), miR-22表达受到抑制时, MTDH mRNA表达明显升高(t=9.637, P<0.01)。Western blot实验证实细胞内MTDH蛋白具有相同的变化趋势。(3)MTDH靶点1突变, 可以显著减弱miR-22抑制MTDH表达的作用(t=6.754, P<0.01), MTDH靶点2突变时也减弱了miR-22对MTDH的调节作用(t=9.225, P<0.01)。MTDH1+2靶点均突变, miR-22对MTDH无明显调节作用(t=2.079, P>0.05)。证实miR-22可以直接靶向调节MTDH的表达, 且两者有两个结合位点。结论 miR-22通过靶向调控MTDH的表达来影响骨肉瘤细胞化疗敏感性。

• 单位
  内蒙古医科大学第二附属医院; 内蒙古自治区人民医院