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摘要
目的:建立实时荧光定量PCR法检测基于新型工程化酵母制备的重组单克隆抗体原液中残留DNA的含量,完善临床前质量控制研究资料。方法:以毕赤酵母工程菌的基因组DNA作为标准品,选择在毕赤酵母中基因拷贝数高的5S rRNA基因作为检测基因,合成特异性引物;通过优化反应体系、加样回收方法,建立实时荧光定量PCR检测糖基工程酵母宿主DNA残余的方法。结果:优化后的实时荧光定量PCR法检测灵敏度达10-3pg/μL,标准品DNA浓度为10～310-3pg/μL时具有很好的线性关系,R2值达0.9984。不同浓度加样实验回收率为80%120%,重组单克隆抗体原液的DNA残余量测定结果为2.45 ng/剂量。结论:建立了一种基于实时荧光定量PCR检测糖基工程酵母制备的单克隆抗体的宿主DNA残余的方法。该方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,可满足药典对毕赤酵母生物制品宿主DNA残余量的要求。为糖基工程酵母制备的重组单克隆抗体和其他生物制品的质量控制提供了一种普适性方法。
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