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摘要
构建一种适用于大豆种子蛋白质组样品制备与液相质谱分析的技术体系,为深入研究大豆蛋白组学创造条件。以大豆品种中黄35成熟期种子为材料,分别对常用的蛋白质提取、酶切、液相分离梯度和数据库进行比较分析。结果表明,使用改进的尿素硫脲蛋白提取法配合赖氨酸C端内切酶/胰蛋白酶顺序酶切法制备的质谱分析样品,经90 min纳升级液相梯度分离和质谱分析,最后采用UniProt数据库解谱时,大豆种子蛋白鉴定数目最多。将此方法应用于大豆品种十胜长叶成熟种子样品制备和分析,3次样品制备重复试验共鉴定非冗余蛋白2 244组,其中61%蛋白质可被重复鉴定。该方法具有一定的可靠性和稳定性,适用于大豆种子蛋白质组样品制备和数据分析。
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