贴壁培养法鉴定海马神经干/祖细胞的增殖与分化能力

作者：胡玉婷; 刘菲; 刘静; 陶欣荣^*

来源：中国组织工程研究, 2019, 23(09): 1330-1335.

• 神经干细胞
• 海马
• 组织工程
• 神经干/祖细胞
• 悬浮培养法
• 贴壁培养法
• 干细胞
• 国家自然科学基金

背景:神经干/祖细胞广泛应用于神经发育、神经相关性疾病和细胞移植等研究,体外分离培养的神经干/祖细胞能够为相关研究提供细胞模型。目的:探讨分离新生小鼠海马组织并高效培养出神经干/祖细胞的方法,并使用贴壁培养法对其增殖以及分化能力进行鉴定。方法:分离新生C57BL/6小鼠海马组织,培养原代神经干/祖细胞并扩增,进行形态学观察;联合使用多聚赖氨酸和层粘连蛋白促进细胞贴附,进行贴壁培养;免疫荧光法检测特异性标志蛋白Nestin表达和增殖指标Ki-67的表达;使用神经干/祖细胞分化培养基诱导分化培养7 d后,免疫荧光法检测GFAP、DCX、Tuj1和S100β的表达。结果与结论:(1)培养的神经干/祖细胞约82%表达Nestin,约49%表达Ki-67;(2)诱导分化后,少数细胞为DCX阳性,大多数细胞为GFAP阳性。荧光双色染色后显示Tuj1和S100β表达的神经元和星形胶质细胞比例为1∶1.7;(3)结果显示,从新生C57BL/6小鼠海马组织中成功分离并高效培养出神经干/祖细胞,贴壁培养后有效地对其增殖和分化能力进行了鉴定,能够为进一步实验研究提供足够的细胞来源。

• 单位
  安徽理工大学