三元融合蛋白MBP-SERPINA3-IFN-κ的表达及抗单纯疱疹病毒/人乳头瘤病毒功能研究

作者：冀旺盛; 王斌; 刘新奇^*

来源：中国病毒病杂志, 2019, 9(06): 443-448.

DOI：10.16505/j.2095-0136.2019.0067

• 融合蛋白MBP-SERPINA3-IFN-κ
• 原核表达
• 亲和层析
• 人乳头瘤病毒
• 1型单纯疱疹病毒
• 促创口愈合

目的原核表达三元融合蛋白MBP-SERPINA3-IFN-κ(简称MSIK),并在细胞和小鼠水平上对其抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的功能进行研究。方法构建三元融合蛋白MSIK的原核表达质粒pET30-MBP-SERPINA3-IFN-κ,将构建好的质粒转入BL21(DE3)codon Plus大肠埃希菌并利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactophyranoside,IPTG)诱导蛋白的表达,经亲和层析纯化得到蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证目的蛋白的纯度,用1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)分别在角质细胞中及BALB/c小鼠上验证该蛋白的抗病毒活性,通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测样本中病毒的含量。结果该融合蛋白经IPTG诱导表达并由亲和层析纯化后,获得相对分子质量约为100×103的纯化蛋白,经SDS-PAGE法检验,并使用Image J进行灰度分析,该融合蛋白纯度大于95%。在角质细胞中,该三元融合蛋白能够有效抑制HSV-1病毒的复制,在小鼠皮肤创伤模型中,该三元融合蛋白同样能够有效抑制HSV-1病毒的复制并能够促进创口的愈合。结论成功表达了三元融合蛋白MSIK,并利用亲和层析柱进行了有效的纯化。获得的融合蛋白具有良好的生物学活性,能够有效抑制HSV-1病毒的复制并促进创口的愈合。该三元融合蛋白可用于研发有效的抗HPV护创敷料,用来治疗一些由HPV引发的相关疾病。

• 单位
  药物化学生物学国家重点实验室