摘要
目的研究5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)能否诱导小鼠海马神经细胞HT22产生自噬对以及TSC1/mTOR通路是否参与其中。方法通过体外培养HT22细胞, 5-Aza-CdR孵育24 h后,采用MTS检测对细胞活力的影响。采用RT-PCR和Western blot,检测TSC1、mTOR和LC3的mRNA和蛋白表达水平;采用组织免疫荧光的方法检测TSC1在不同组别HT22细胞中的表达;通过转染TSC1质粒,检测TSC1/mTOR途径在自噬中的作用。结果 10μmol·L-1 5-Aza-CdR可降低HT22细胞的活力,5-Aza-CdR使TSC1 mRNA和蛋白表达水平增加,p-mTOR (Ser2448)蛋白水平降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高;过表达TSC1后小鼠海马HT22细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高。结论 5-Aza-CdR可以诱导HT22自噬增加,可能是通过启动TSC1/mTOR通路。
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单位包头医学院; 四川大学