Ghrelin对骨髓源性内皮祖细胞迁移能力的影响

作者：王丽; 陈庆伟; 李桂琼; 杨彦; 曹广煜; 李兴升

来源：解放军医学杂志, 2012, (10): 935-942.

• ghrelin
• 内皮
• 干细胞
• 细胞运动 ghrelin
• endothelium
• stem cells
• cell movement

目的探讨ghrelin对体外培养的内皮祖细胞(EPCs)迁移能力的影响及相关的信号转导途径。方法密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞层,接种至纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7～10d后观察细胞形态学改变,以免疫组织化学染色法检测Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL),FITC标记的荆豆凝集素l(FITC-UEA-1),以及CD34、CD133、人血管性血友病因子(vWF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)特异的酪氨酸激酶受体(Flk-1),鉴定细胞种类后传代培养。采用不同浓度(10-9～10-6mol/L)的ghrelin干预EPCs后,通过Transwell小室迁移实验检测EPCs迁移能力的变化。用不同浓度(10-9～10-6mol/L)的ghrelin干预EPCs 15min或10-7mol/L的ghrelin干预0～60min,Western blotting检测蛋白激酶B(Akt)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及其磷酸化状态的表达;分别用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的特异性抑制剂LY294002和eNOS的特异性抑制剂L-NAME预处理EPCs,检测ghrelin对EPCs迁移及Akt、eNOS及其磷酸化蛋白表达的变化。结果新分离24h内的EPCs近似圆形,培养第4~7天转化为梭形贴壁细胞,培养至第9天后梭形细胞呈条索样排列生长。Dil-acLDL和FITC-UEA-1双染色阳性,CD34、CD133、vWF和flk-1免疫组织化学染色均呈阳性反应。分别用10-9～10-6mol/L的ghrelin干预内皮祖细胞,发现10-8、10-7mol/L的ghrelin可明显促进内皮祖细胞的迁移(P<0.001),而更高浓度(10-6mol/L)的ghrelin则可显著抑制EPCs的迁移(P<0.05)。Ghrelin呈时间和剂量依赖性地促进EPCs表达磷酸化Akt和eNOS;PI3K特异性抑制剂LY294002能明显抑制ghrelin诱导的Akt、eNOS的磷酸化表达(P<0.05);eNOS的特异性抑制剂L-NAME能明显抑制ghrelin诱导的eNOS磷酸化表达(P<0.05),但对Akt的磷酸化表达无影响。LY294002和L-NAME均能显著抑制ghrelin诱导的内皮祖细胞迁移(P<0.05)。结论 Ghrelin可通过激活PI3K/Akt/eNOS信号途径促进骨髓源性EPCs迁移,...

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院