双重数字PCR法评价Luc2P系列报告基因细胞系的稳定性

作者：于雷; 王光裕; 裴德宁; 安怡方; 史新昌; 周勇

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(07): 826-832+838.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003952

• 报告基因细胞系
• 萤光素酶
• 稳定性
• 双重数字PCR

目的 建立双重数字PCR（digital PCR,dPCR）法评价Luc2P系列报告基因细胞系（CHO-K1、Hacat、HEK293和UT7）的萤光素酶（luciferase,Luc）基因稳定性。方法 提取Luc2P系列报告基因细胞系的基因组DNA，建立一种双重dPCR法，同时检测内参基因RPP30和目标基因Luc的拷贝数，以Luc相对拷贝数（copies Luc/copy RPP30）为指标评价Luc基因稳定性；参考《中国药典》三部（2020版）相关要求对建立的方法进行专属性、精密性、线性、准确性和耐用性验证，并分析方法的适用性。结果 未转染报告基因的原始细胞检测结果均为阴性，而4种报告基因细胞系中均可检测到阳性结果，且dPCR结果中阴性和阳性区可明显区分；以相对拷贝数为指标，采用芯片式dPCR法重复检测8次同一基因组DNA样品以及同一细胞6次独立提取的基因组DNA样品的相对标准偏差（RSD）均小于10%,Luc和RPP30的线性拟合R2均大于0.99，建立的方法检测5组加标样本的加标回收率在50%～100%之间，且芯片式dPCR和液滴式dPCR检测结果一致。该方法可区分不同细胞克隆的Luc相对拷贝数，检测3个代次（P8、P12、P31）细胞Luc相对拷贝数的结果高度一致。结论 建立的双重dPCR法专属性、精密性、线性、准确性、耐用性和适用性良好，可用于Luc2P系列报告基因细胞系的Luc基因稳定性评价。

• 单位
  中国食品药品检定研究院