摘要
目的 探讨中药复方益心方改善心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及其机制。方法 将60只清洁级Wistar大鼠随机分为4组,即假手术组、心肌缺血再灌注组(模型组)、益心方预处理+心肌缺血再灌注组(益心方组)、益心方预处理+心肌缺血再灌注+沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂组(益心方+抑制剂组),每组15只。各组大鼠适应性喂养7 d后,益心方组和益心方+抑制剂组给予益心方(10 mL/kg)灌胃7 d,其余各组灌胃等体积的质量分数为0.9%的氯化钠溶液。术前3 d及术前20min,益心方+抑制剂组尾静脉注射SIRT1抑制剂sirtinol(2 mg/kg),其余各组尾静脉注射等体积的质量分数为0.9%的氯化钠溶液。假手术组只穿线不结扎;其余各组结扎冠状动脉左前降支30 min,建立心肌缺血损伤模型,术中观察心电图变化情况。再灌注后检测心电图,观察再灌注模型是否建立成功;采用超声心动图和血流动力学检测评价各组大鼠的心功能;苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌组织病理形态学的变化;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡指数;生化法检测各组大鼠血清中的肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)活性;免疫组织化学法和Western blot法检测SIRT1、过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子-1α(PGC-lα)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)表达情况。结果 (1)与假手术组比较,模型组大鼠心电图ST段明显抬高,表明大鼠心肌缺血模型建立成功;超声心动图和血流动力学检测显示,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)降低,左心室舒张末压(LVDP)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)升高(P<0.05);TTC染色结果显示,模型组大鼠心肌梗死面积增加(P<0.05);生化检测结果显示,模型组大鼠血清中CK、LDH、MDA、H2O2水平升高,SOD水平降低(P<0.05);免疫组织化学法和Western blot检测结果显示,模型组大鼠心肌组织中Bcl-2、SIRT1、PGC-1α表达下降,Bax表达升高(P<0.05)。(2)与模型组比较,益心方组心肌梗死的面积减少,LVEF、LVFS、LVSP、+dp/dtmax升高,LVDP、-dp/dtmax降低,左心室射血量增加,心功能改善(P<0.05);血清CK、LDH、MDA、H2O2水平降低,SOD水平升高(P<0.05);心肌组织中Bcl-2、SIRT1、PGC-1α表达升高,Bax表达降低(P<0.05)。(3)与益心方组比较,益心方+抑制剂组大鼠血清CK、LDH、MDA、H2O2水平升高,SOD水平降低(P<0.05);心肌组织中Bcl-2、SIRT1、PGC-1α表达降低、Bax表达升高(P<0.05)。结论 益心方预处理能够减轻氧化应激损伤和细胞凋亡,改善心肌缺血再灌注损伤,其作用机制可能与调控SIRT1/PGC-1α信号通路相关。
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单位上海中医药大学附属曙光医院