沉默UVRAG对白血病K562/ADM细胞自噬及耐药性的影响

作者：曹强强; 殷小成; 肖亮; 肖正香

来源：肿瘤基础与临床, 2016, 29(03): 185-190.

• 紫外线抵抗相关基因
• K562/ADM细胞
• 自噬
• 耐药性

目的探讨沉默紫外线抵抗相关基因(UVRAG)对人白血病K562/ADM细胞自噬及耐药性的影响。方法 Western Blotting检测UVRAG蛋白在K562及K562/ADM细胞中表达差异。特异性干扰UVRAG基因的UVRAG siRNA及Scramble siRNA在Lipofectamine TM2000介导下转染K562/ADM细胞,CCK-8法、MDC荧光染色及Western Blotting分别检测UVRAG siRNA转染前后K562/ADM细胞耐药性、自噬水平以及P-糖蛋白(P-gp)表达的变化。结果 Western Blotting检测显示K562/ADM细胞中UVRAG蛋白表达明显高于K562细胞(P<0.05);与K562/ADM组及Scramble siRNA转染组相比,UVRAG siRNA转染组UVRAG蛋白表达显著下降(P<0.05),以48 h效果最佳,提示UVRAG siRNA能高效沉默K562/ADM细胞UVRAG;CCK-8法显示与K562/ADM组及Scramble siRNA转染组相比,UVRAGsiRNA组对阿霉素敏感性显著增高,IC50值明显下降(P<0.05);MDC染色荧光显微镜观察到UVRAG siRNA转染后K562/ADM细胞胞浆中自噬泡明显减少;Western Blotting显示K562/ADM细胞中Beclin-1、P-gp表达及P62降解明显高于K562细胞,与K562/ADM细胞及Scramble siRNA转染组相比,UVRAG siRNA转染组Beclin-1、P-gp表达及P62降解显著降低(P均<0.05)。结论 UVRAG蛋白在K562/ADM细胞中高表达,与白血病MDR密切相关;UVRAG siRNA下调UVRAG表达可降低K562/ADM细胞耐药性,其机制可能与降低自噬水平及下调P-gp表达有关。

• 单位
  湘潭市中心医院; 南华大学附属第一医院