3种蚊媒病毒快速荧光PCR检测方法与性能评价

作者：徐聪灵; 王静; 杨绪理; 陈峰; 刘文干^*; 耿合员^*

来源：病毒学报, 2023, 39(03): 743-751.

DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004331

• 快速荧光PCR检测
• 蚊媒病毒

建立寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）、登革病毒（Dengue virus,DENV）和黄热病毒（Yellow fever virus,YFV）3种蚊媒传染病核酸快速实时荧光定量检测方法。以寨卡病毒polyprotein gene基因，登革病毒NS5基因，黄热病毒3’UTR基因作为靶区域设计相应的引物探针，探针的5’端分别标记不同的荧光基团，3’端标记相应的淬灭基团，对扩增体系中引物探针浓度、热启动Taq酶浓度、逆转录酶浓度、RNA酶抑制剂浓度分别进行优化。构建了一种可同时用于寨卡病毒、登革病毒和黄热病毒三重快速荧光PCR检测体系，25μL扩增体系中ZIKV、DENV和YFV的引物浓度分别为200 nmol/L、240 nmol/L和240 nmol/L；探针浓度分别为200 nmol/L、240 nmol/L和80 nmol/L；热启动Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的终浓度为分别为2.5U/反应、60U/反应和80U/反应。该检测体系对3种病原体的最低检测限均为1.0×103拷贝/mL，在MIC IAT C2-48和ABI7500两种不同型号的实时荧光定量PCR仪上检测结果一致，对登革热、寨卡和黄热病毒血清样本检测均为阳性扩增，与丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、副流感病毒、腺病毒等无交叉反应。因此，本研究建立的寨卡病毒、登革病毒和黄热病毒的三重快速荧光PCR检测体系可用于对上述3种病毒的定性或定量检测。

• 单位
  江苏国际旅行卫生保健中心; 安徽安龙基因科技有限公司