乙型肝炎病毒前基因组RNA表达的基因型依赖性调节

作者：李亚茹; 卢凯; 朱慧慧; 黄迎丽; 李雨轩; 马园园; 孙锁锋^*; 李修岭^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2023, 37(03): 279-283.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2023.03.014

• 乙型肝炎病毒
• 增强子EnhⅡ
• 核心启动子
• 基因型

目的 观察乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)Aa、Ae、Bj、Bj-56、Ce、D基因型感染Huh7细胞前基因组RNA(pregenomic RNA, pgRNA)核心启动子转录活性差异，探讨影响HBV转录调控的可能位点。方法 (1)取对数生长期Huh7细胞，分为Aa组(转染pGL4.10-HBVpgRNA-Aa),Ae组(转染pGL4.10-HBVpgRNA-Ae),Bj组(转染pGL4.10-HBVpgRNA-Bj),Bj-56组(转染pGL4.10-HBVpgRNA-Bj-56),Ce组(转染pGL4.10-HBVpgRNA-Ce),D组(转染pGL4.10-HBVpgRNA-D)和Huh7对照组(转染pGL4.10空载体),各组均加入海肾荧光素酶载体pGL4.74共转染，转染48 h检测荧光素酶活性。(2)取HBV Huh7 Ae基因型突变体细胞Ae/Bj-EnhⅠ(Ae/Bj-EnhⅠ组)、Ae/Bj-NRE(Ae/Bj-NRE组)、Ae/Bj-EnhⅡcore(Ae/Bj-EnhⅡcore组),和HBV Huh7 Ae基因型细胞(HBV Huh7 Ae组)转染pGL4.10-HBVpgRNA-Ae, HBV Huh7 Ae对照组细胞转染pGL4.10空载体，各组均加入海肾荧光素酶载体pGL4.74共转染，转染48 h检测荧光素酶活性。(3)取HBV Huh7 Bj基因型突变体细胞Bj/Ae-EnhⅠ(Bj/Ae-EnhⅠ组)、Bj/Ae-NRE(Bj/Ae-NRE组)、Bj/Ae-EnhⅡcore(Bj/Ae-EnhⅡcore组)和HBV Huh7 Bj基因型细胞(HBV Huh7 Bj组)转染pGL4.10-HBVpgRNA-Bj, HBV Huh7 Bj对照组细胞转染pGL4.10空载体，各组均加入0.1μg海肾荧光素酶载体pGL4.74共转染，转染48 h检测荧光素酶活性。结果 (1)Bj组、Bj-56组、D组、Ce组、Aa组、Ae组荧光素酶活性(1 324.000±89.034、1 191.000±89.011、937.330±41.885、632.670±46.372、588.000±14.107、399.000±19.672)依次降低(P<0.05),均高于Huh7对照组(7.330±1.528)(P<0.05);Bj组荧光素酶活性明显高于Ae组(t=17.571,P<0.001)。(2)Ae/Bj-EnhⅡcore组、Ae/Bj-NRE组、HBV Huh7 Ae组、Ae/Bj-EnhⅠ组荧光素酶活性(3 225.670±164.564、964.330±69.573、837.000±48.135、778.670±25.580)依次降低(P<0.05),均高于HBV Huh7 Ae对照组(7.670±1.528)(P<0.05);Ae/Bj-EnhⅡcore组荧光素酶活性明显高于HBV Huh7 Ae组(t=24.130,P<0.001)。(3)Bj/Ae-EnhⅠ组、Bj/Ae-NRE组、HBV Huh7 Bj组、Bj/Ae-EnhⅡcore组荧光素酶活性(3 436.670±511.451、2 709.670±213.641、2 480.330±315.053、706.670±18.556)依次降低(P<0.05),均高于HBV Huh7对照组(7.670±1.528)(P<0.05);Bj/Ae-EnhⅡcore组荧光素酶活性值明显低于HBV Huh7 Bj组(t=-9.374,P<0.001)。结论 Aa、Ae、Bj、Bj-56、Ce、D基因型中EnhⅡcore区域是影响HBV转录调控的重要位点。

• 单位
  河南省人民医院; 新乡医学院; 郑州大学; 河南大学