结核杆菌Rv0901基因真核表达质粒的构建及在细胞内的表达与鉴定

作者：钟琪; 鲍朗; 黄毕; 商正玲; 姚素霞; 刘鱼

来源：中国病原生物学杂志, 2007, 2(5): 329-331.

DOI：10.3969/j.issn.1673-5234.2007.05.003

• 结核杆菌
• Rv0901
• 脂质体转染
• 真核表达

目的 构建结核杆菌Rv0901基因的真核表达质粒并进行表达,为研究Rv0901基因的功能提供材料.方法 以结核杆菌基因组DNA为模板PCR扩增Rv0901基因序列,将Rv0901基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)获得重组表达质粒,体外转染Cos7细胞,RT-PCR检测转染的情况,并提取转染细胞总蛋白和收集细胞培养液上清检测蛋白的表达,Western-blotting检测蛋白表达的特异性.结果 成功扩增出Rv0901基因序列,成功构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-Rv0901,重组质粒转染细胞后的RT-PCR能扩增出Rv0901基因序列,转染细胞总蛋白和细胞培养液上清均能特异表达Rv0901基因蛋白.结论 成功构建Rv0901基因真核表达质粒并在真核细胞内进行了良好表达,为研究该基因功能打下了坚实基础.

• 单位
  四川大学