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摘要
以中国春小麦叶、茎、幼穗及花后3、6、9、12、15、20、25 d的籽粒为材料，利用Gateway技术构建中国春小麦cDNA初级文库和次级文库，由次级文库质粒转化Y187酵母菌株构建出酵母双杂交文库。通过mating法筛选小麦粒质量基因 TaDAR1的互作蛋白，以此来鉴定文库的有效性。结果表明：初级文库容量为1.82×107CFU/mL、次级文库的容量为1.91×107 CFU/mL,文库重组率均大于96%,插入片段平均长度在1000 bp以上。酵母双杂交文库转化效率为1.97×105 CFU/μg,文库容量为2.04×107 CFU/mL。构建诱饵载体pGBKT7-TaDAR1并转化Y2H酵母菌株，经检验存在自激活现象，进一步截断检测发现此蛋白N端无自激活，C端有自激活，以BD-TaDAR1-N为诱饵载体，筛选酵母文库，获得其互作蛋白序列，并命名为TaDAR1IP,经回转验证TaDAR1-N与TaDAR1IP存在相互作用关系。表明本试验方案构建的酵母文库是高质量的有效的。为初学者构建酵母双杂文库及使用“mating”法筛选酵母文库提供借鉴，也为后续小麦基因功能的研究奠定基础。
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