人内皮高表达脂多糖相关因子1蛋白亚细胞定位研究

作者：罗敏; 梁自文; 杨宗城; 罗向东

来源：中华烧伤杂志, 2010, 26(6): 444-447.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2010.06.013

• 内皮细胞
• 显微镜检查
• 免疫电子
• 转染
• 亚细胞定位
• 内皮高表达脂多糖相关因子1
• 绿色荧光质粒

目的 了解人内皮高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)蛋白在内皮细胞中的亚细胞定位情况.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,另构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)-EOLA1融合蛋白表达质粒.用脂质体分别将空质粒pEGFP-N2和融合蛋白表达质粒EGFP-EOLA1转染入ECV304细胞.继续培养48 h,取细胞,用蛋白质印迹法鉴定EGFP及EGFP-EOLA1融合蛋白的表达;采用激光共聚焦显微镜和免疫电镜技术,观察细胞中EOLA1蛋白的亚细胞定位情况.结果 经酶切和测序鉴定证实重组质粒EGFP-EOLA1构建成功.蛋白质印迹法检测结果显示,EGFP和EGFPEOLA1融合蛋白在转染细胞中成功表达.激光共聚焦显微镜下见转染空质粒的ECV304,绿色荧光遍布整个细胞,但无细胞核聚集现象;转染融合蛋白表达质粒的ECV304,绿色荧光也呈全细胞分布,且在胞核内明显聚集.透射电镜下见转染空质粒的细胞内无免疫沉积物,转染融合蛋白表达质粒的细胞质基质中有免疫沉积物.结论 EOLA1蛋白定位在ECV304细胞核与细胞质基质中,作为信号转导因子发挥作用.

• 单位
  第三军医大学西南医院