小分子干扰RNA特异性抑制胃癌SGC7901细胞人端粒酶催化亚单位基因表达的研究

作者：马晋平; 詹文华; 汪建平; 彭俊生; 高劲松; 殷勤伟

来源：中华外科杂志, 2004, (22): 31-35.

• RNA干扰
• RNA,小分子干扰
• 胃肿瘤
• 端粒酶催化亚单位
• 短发夹RNA

目的　构建针对人端粒酶催化亚单位 (humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)基因的小分子干扰RNA(smallinterferingRNA ,siRNA)表达载体pU6 hTERT siRNAs,观察其对胃癌SGC790 1细胞hTERT基因的特异性抑制作用。方法　采用报告基因质粒pCX GFP( 5 5 10bp)和含有鼠U6启动子pU6 ( 330 0bp)质粒 ,设计合成针对绿色荧光蛋白 (GFP)基因的发夹RNA(shRNA)序列 ,构建SHi pU6 GFP质粒。应用LipofectamineTM2 0 0 0将pCX GFP质粒和SHi pU6 GFP质粒转染K5 6 2细胞、SGC790 1细胞 ,并用荧光显微镜观察转染效果。设计合成针对hTERT的siRNAs ,构建重组pU6 hTERT siRNAs质粒。LipofectamineTM2 0 0 0介导pU6 hTERT siRNAs质粒转染SGC790 1细胞。分别应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和荧光定量聚合酶链式反应 (FQ PCR)定性和定量检测hTERT基因表达情况。结果　质粒pU6和SHi pU6 GFP经EcoRⅤ和XbaⅠ酶切电泳后 ,前者出现 330 0bp和约 30 0bp条带 ,而后者出现 330 0bp和约 35 0bp条带 ,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi pU6 GFP质粒。K5 6 2细胞和SGC790 1细胞中分别观察到转染pCX GFP质粒和SHi pU6 GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少。定性、定

• 单位
  中山大学; 中山大学附属第一医院