FimH1-156融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化

作者：尹仕伟; 邹丽云; 张莹; 张晋宇; 唐莎; 施维维; 吴玉章; 袁发焕; 张静波

来源：重庆医学, 2014, 43(05): 589-591.

• FimH1-156
• 融合蛋白
• 表达
• 纯化

目的构建含有与溶酶体膜蛋白2(LAMP-2)P41-49完全同源序列的尿路致病性大肠杆菌(UPEC)Ⅰ型菌毛FimH1-156为目的基因的原核载体,表达并纯化FimH1-156融合蛋白。方法采用PCR克隆pPKL241质粒获取FimH1-156基因,插入原核表达载体pET28a(+);将重组表达质粒转染感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达FimH1-156融合蛋白,超声裂解细菌,NiNTA层析法进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析、蛋白免疫印迹法(Western blot)对其进行鉴定。结果成功构建表达载体,经对融合蛋白表达条件的优化,在IPTG浓度为1mmol/L,诱导4h目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在;Western blot证实该FimH1-156融合蛋白可与抗6×His单克隆抗体发生结合反应。结论成功克隆FimH1-156融合蛋白表达基因并构建至原核表达载体,获得了包涵体纯化的FimH1-156融合蛋白,为下一步建立实验动物模型奠定了基础。

• 单位
  第三军医大学新桥医院