甲基化转移酶样蛋白3对颞下颌关节骨关节炎滑膜巨噬细胞NLRP3炎性小体和焦亡的影响

作者：庞春燕; 方婕; 祁荷栩; 肖力^*

来源：暨南大学学报(自然科学与医学版), 2022, 43(06): 565-572.

DOI：10.11778/j.jdxb.20220218

• 甲基化转移酶样蛋白3
• 颞下颌关节骨关节炎
• 巨噬细胞
• NLRP3炎性小体
• 细胞焦亡

目的:探讨甲基化转移酶样蛋白3(METTL3)对颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)巨噬细胞NLRP3炎性小体和焦亡的调控效应。方法:将16只雄性SD大鼠随机分为对照组和TMJOA模型组。采用H&E染色、阿利新蓝染色和番红固绿染色观察关节软骨组织关节炎情况，并进行Mankin’s和骨关节炎软骨损伤分级(OARSI)评分。采用脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导巨噬细胞RAW264.7以构建焦亡细胞模型，被转染METTL3过表达质粒和小干扰RNAs(siRNAs)。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测颞下颌关节滑液或RAW264.7细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)的活性；免疫印迹检测滑液巨噬细胞或RAW264.7中METTL3,NLRP3炎性小体和焦亡相关蛋白，IκBα和p65磷酸化水平。结果:在体内实验中，与对照组比较，TMJOA模型组大鼠出现关节软骨组织损伤，Mankin’s评分和OARSI评分升高；大鼠颞下颌关节滑液中乳酸脱氢酶(LDH)活性增强；颞下颌关节滑液巨噬细胞中METTL3,NLRP3炎性小体和焦亡相关蛋白表达水平增加。在体外实验中，METTL3过表达显著协同LPS联合ATP诱导的RAW264.7细胞NLRP3炎性小体形成和细胞焦亡，增强LDH活性，并激活IκBα和p65磷酸化；然而，通过转染siRNAs敲低METTL3表达能够显著抑制LPS联合ATP诱导的RAW264.7细胞NLRP3炎性小体形成和细胞焦亡，抑制LDH活性，减少IκBα和p65磷酸化水平。结论:METTL3沉默可通过拮抗NF-κB信号通路抑制NLRP3炎性小体和焦亡改善TMJOA软骨损伤。

• 单位
  四川大学华西口腔医院; 口腔疾病研究国家重点实验室; 四川省人民医院