AD-004蛋白表达、抗体制备及其在睾丸和肾上腺组织中的表达分析

作者：乔洁; 郑翠霞; 陈霞; 李雪松; 李圣贤; 马勤耘; 赵双霞; 袁国跃; 陈名道

来源：中华内分泌代谢杂志, 2006, (04): 367-371.

• AD-004蛋白
• 原核表达
• 腺苷酸激酶
• 抗体,多克隆

目的以原核表达的小鼠肾上腺蛋白AD-004为免疫原,制备抗AD-004的兔多克隆抗体,并明确其在肾上腺、睾丸组织中的分布。方法将小鼠AD-004 eDNA克隆于原核表达载体PET28,经IPTG诱导AD-004的表达。用Ni2+-NTA纯化后的蛋白为免疫原制备抗AD-004多克隆抗体。通过Western印迹鉴定抗体特异性及效价,并用此抗体对小鼠睾丸、肾上腺组织进行免疫组织化学分析。结果此原核表达系统可高效表达AD-004蛋白,Western印迹结果显示所制备的抗体具有很高的效价和特异性,免疫组化提示AD-004蛋白在肾上腺的髓质表达较高,而在睾丸中主要表达于间质的Leydig细胞。结论本研究获得了小鼠AD-004原核表达蛋白,成功制备了AD-004多克隆抗体,并发现其在睾丸间质Leydig细胞表达最高,提示AD-004可能在睾丸性激素的合成过程中起重要作用。

• 单位
  上海交通大学医学院附属第九人民医院; 上海交通大学医学院附属仁济医院; 上海交通大学医学院附属瑞金医院