犬瘟热病毒RT-LAMP-LFD检测方法的建立与应用

作者：郝镯; 李楠; 张珊珊; 李吉平; 何洪彬; 孟轲音; 李筱鑫; 万忠海; 穆玉堂; 李忠义; 田多; 李晓娜; 王承宇^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2019, (17): 1-180.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.12.0431

• 犬瘟热病毒
• 横向流动试纸条技术
• N基因
• 环介导等温扩增技术
• 敏感性
• 特异性

为了建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)的方法,试验采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合的方法,根据CDV N基因序列中同源性相对较高的保守区设计一套标有生物素(biotin)的特异性引物,结合异硫氰酸(FITC)荧光素标记的扩增产物,建立RT-LAMPLFD检测方法,对该方法的反应条件和反应体系进行优化,同时分析敏感性及特异性,最后检测临床应用情况。结果表明:试验成功构建CDV RT-LAMP-LFD方法,此方法的最佳反应条件为60℃反应60 min;最佳的反应体系为镁离子浓度12 mmol/L,甜菜碱浓度0. 2 mmol/L,Bst DNA聚合酶活性8 U,AMV酶活性5 U,外引物与环引物比例1∶2;最低检测下限为1×102个拷贝/m L,能够特异地检测出CDV的存在,犬细小病毒(CPV)等其他病毒均为阴性,可以检测出病犬口鼻腔黏液中的CDV。说明试验建立的CDV RT-LAMP-LFD检测方法特异性强,敏感性高,操作简单,可广泛应用。

• 单位
  山东师范大学