非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定

作者：侯浩宇; 郑南南; 吴宏举; 陈寅龙; 李潮; 张昂克; 姬鹏超; 万博; 杜永坤^*; 张改平^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(03): 1241-1249.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.03.038

• 非洲猪瘟病毒(ASFV)
• p30蛋白
• 单克隆抗体
• CP204L基因

【目的】制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p30蛋白的单克隆抗体，为非洲猪瘟快速诊断检测方法的建立和疫苗研究提供材料。【方法】构建p30原核表达质粒pET-30a(+)-p30,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达，通过镍柱亲和层析获得目的蛋白。p30复性后，每2周对BALB/c小鼠免疫3次，将免疫小鼠的脾脏与骨髓瘤细胞融合制备单克隆抗体，通过ELISA方法和亚克隆筛选分泌抗体的杂交瘤细胞。将筛选出的单克隆细胞注射进小鼠腹腔制备腹水，通过Western blotting检测、免疫荧光测定(IFA)和抗体亚型分析来鉴定单克隆抗体。【结果】试验成功构建了p30蛋白的原核表达质粒，并使用IPTG诱导、纯化获得了原核系统表达的重组p30蛋白；成功制备出4株能稳定分泌针对ASFV p30蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为：1H3B4、3F2F5、6E3A1和9D6B9。经ELISA测定抗体腹水效价在1∶100 000～1∶1 000 000之间。经Western blotting和IFA鉴定筛选得到的单克隆抗体与p30蛋白能发生特异性反应。经亚型鉴定，3F2F5和9D6B9 2株单克隆抗体的重链均为IgG2b,轻链均为Kappa; 6E3A1株单克隆抗体的重链为IgM,轻链为Kappa; 1H3B4株单克隆抗体的重链为IgG2b,轻链为Lambda。【结论】试验成功制备了4株针对ASFV p30蛋白的单克隆抗体，并分析了单克隆抗体的免疫学特性，为p30蛋白的生物学功能研究和ASFV血清学检测提供依据。

• 单位
  河南农业大学