2型猪链球菌cps2D基因敲除株的构建及其基本生物学特性的研究

作者：刘旭苗; 王悄悄; 林苗; 倪华; 郑峰; 王怡雯; 汪春晖; 潘秀珍^*; 曹祥荣^*

来源：中国人兽共患病学报, 2022, 38(04): 285-290.

• 2型猪链球菌
• 荚膜多糖
• 酪氨酸激酶Cps2D
• 基因敲除
• 生物学性状

目的 构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(Δcps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株Δcps2D基本生物学特性的差异。方法 设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及SpcR抗性基因S片段，将3个片段连接至pUC19线性载体上，构建敲除质粒pUC19::cps2D。将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后，利用SpcR抗性平板筛选敲除株，并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证。比较野毒株05ZYH33和敲除株Δcps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同。结果 L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1 030 bp)、R(1 030 bp)以及S(1 130 bp)基因片段；通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆，筛选出26个疑似敲除株；组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株Δcps2D;与野毒株05ZYH33相比，Δcps2D对数期生长变缓，链长显著变短，荚膜稀疏变薄。结论 成功构建cps2D基因敲除株，为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础。

• 单位
  喀什大学; 生命科学学院; 南京师范大学