CRISPR/Cas 9系统构建敲除FN表达的卵巢癌稳定表达细胞系研究

作者：霍茜瑜; 邵艳宏; 程优; 刘亚珊; 李雪; 刘运德; 鲍会静^*

来源：重庆医学, 2020, 49(11): 1737-1745.

• 卵巢肿瘤
• 纤维连接蛋白
• 基因敲除技术
• CRISPR/Cas 9

目的利用CRISPR/Cas 9系统在人卵巢癌细胞系OVCAR3中构建敲除纤维连接蛋白(FN)表达的稳定表达细胞系。方法检测4株卵巢癌细胞系FN表达情况。使用E-CRISP网站设计针对FN基因的向导RNA(sgRNA)序列,将序列连接到lenti-CRISPR-V2质粒后转染高表达FN的OVCAR3细胞。鉴定构建的细胞系FN表达情况。结果在4株细胞系中选择高表达FN的OVCAR3细胞转入测序结果正确的lenti-CRISPR-V2-FN-sgRNA重组质粒,q-PCR和Western blot方法验证结果显示,其成功降低了卵巢癌OVCAR3细胞的FN的表达水平。结论 CRISPR/Cas 9系统能建立敲除FN表达的卵巢癌稳定表达细胞系。

• 单位
  天津市南开医院; 天津医科大学