pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒的构建及在HePG_2细胞的表达定位

作者：黄湘; 谭家余; 邱玉林; 梁文军; 周铭; 李明

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2009, 25(05): 402-405.

• 真核表达质粒
• HePG_2
• LOC51255
• 构建
• 表达
• 亚细胞定位

目的:构建pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒并检测其在人肝癌细胞株HePG2中的表达和亚细胞定位。方法:采用PCR法从pET28b/LOC51255重组质粒中克隆得到LOC51255cDNA全长序列,并将该片段亚克隆到真核表达载体pDsRed1-C3中。构建好的pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒转染人肝癌细胞株HePG2,再用荧光显微镜直接观察LOC51255在其中的表达及定位情况。结果:经双酶切及DNA测序结果证实成功构建重组质粒pDsRed1-C3/LOC51255;荧光显微镜观察证实该重组质粒能在HePG2细胞中表达,且LOC51255蛋白主要定位于HePG2细胞的细胞质。结论:成功构建pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒,并在HePG2细胞中得到表达,同时证实LOC51255定位于HePG2细胞的胞质,为进一步研究人类LOC51255基因的功能奠定了基础。

• 单位
  南方医科大学; 嘉应学院医学院