基于报告基因的重组人促卵泡激素Fc融合蛋白生物学活性测定方法研究

作者：孙爽; 王绿音; 李晶; 吕萍; 徐可铮; 梁誉龄; 张慧; 李湛军; 梁成罡^*

来源：药物分析杂志, 2022, 42(01): 60-67.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2022.01.07

• 重组人促卵泡激素Fc融合蛋白
• 长效重组蛋白药物
• 报告基因法
• 环磷酸腺苷
• CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞
• 生物学活性测定
• 方法学验证
• 信号通路

目的:利用转基因细胞法建立重组人促卵泡激素Fc融合蛋白(rhFSH-Fc)生物学活性检测方法。方法:利用CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞，按一定细胞密度种板，培养16～20 h后吸弃培养基，将rhFSH-Fc倍比稀释加入细胞板，药物作用一段时间后加入荧光素酶检测试剂，通过荧光素酶检测系统对rhFSH-Fc进行生物性活性检测，并对各试验条件参数优化及进行方法学验证。结果:rhFSH-Fc在该方法中存在量效关系且符合四参数曲线方程，R2大于0.99;方法优化后确定细胞种板密度为5×105个·mL-1,rhFSH-Fc稀释起始浓度为750 ng·mL-1,1∶5倍的稀释倍数，诱导时间为4 h,样品稀释液为DMEM/F12K+10%FBS。该方法具有良好的专属性，9次独立日间、日内精密度检测RSD均小于5%,5个不同稀释组回收率样本经6次测定，相对效价分别为(51±2.00)%、(78±2.05)%、(94±2.23)%、(124±3.46)%、(141±4.45)%;对应回收率平均值分别为(101±3.94)%、(104±3.00)%、(94±2.24)%、(99±2.68)%、(94±3.03)%,RSD均小于4%。结论:本研究利用转基因细胞成功建立rhFSH-Fc生物学活性测定方法，该方法操作简便，重复性好，准确性高，可用于rhFSH-Fc产品的常规检测。

• 单位
  沈阳药科大学; 中国食品药品检定研究院