木薯β-葡萄糖苷酶的毕赤酵母表达体系构建及酶学性质分析

作者：郭东衡; 王平; 徐燕杉; 郑穗平

来源：中国,上海市.

• 木薯β-葡萄糖苷酶
• 毕赤酵母
• 展示表达
• 酶学性质

　　β-葡萄糖苷酶目前广泛应用于合成烷基糖苷、芳基糖苷和辅助纤维素酶水解纤维素.据报道,天然来源的木薯β-葡萄糖苷酶具有很高的转糖苷活性.本研究将来自于木薯(cassava)的β-葡萄糖苷酶(MEBGL)在毕赤酵母中实现了展示表达.以EcoRI和MluI为双酶切位点,以Gcw21p为酵母表面锚定蛋白,成功构建了酵母表面展示重组质粒pKMEBGL-GCW21.线性化重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过MD组氨酸缺陷型平板筛选转化子、摇瓶发酵复筛,获得木薯β-葡萄糖苷酶表面展示型菌株GS115/ pKMEBGL-GCW21.研究表明,以pNPG为水解底物,在甲醇诱导120h时,冻干菌体水解酶活为0.6U/g,水解pNPG的最适温度35℃,最适pH为6.0；在未经条件优化的条件下,冻干菌体转糖苷活力为118.9 U/(g.dry cell).未经条件优化的烷基糖苷初步合成实验表明,表面展示的MEBGL具有很强的烷基糖苷合成能力；相信经过条件优化后,转化率会达到更高的水平.

• 单位
  华南理工大学