MiR-125a-5p靶向胰岛素样生长因子1受体调节川崎病中内皮细胞的增殖和迁移

作者：吕爱婷^*; 何坤; 李莹莹; 候维纳; 孙琪青

来源：临床与病理杂志, 2023, 43(02): 211-220.

• miR-125a-5p
• 胰岛素样生长因子1受体
• 川崎病
• 内皮细胞
• 增殖
• 迁移

目的：探讨miR-125a-5p靶向胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)对川崎病内皮细胞增殖与迁移的影响。方法：培养人冠状动脉内皮细胞(humancoronaryarteryendothelialcells,HCAECs)，将细胞分为对照组(20%正常人血清)、20%川崎病血清组(20%川崎病患儿血清)、20%川崎病血清+抵制剂(inhibitor)正常对照(normal control,NC)组、20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor组、20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor+siRNA组、20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor+si IGF1R组，除对照组添加20%正常人血清外，其余各组均添加20%川崎病患儿血清培养。定量RT-PCR法测定miR-125a-5p、IGF1R mRNA表达水平，蛋白质印迹法测定IGF1R蛋白表达；细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法测定HCAECs细胞增殖能力；Transwell法测定细胞迁移能力；蛋白质印迹法测定Ki-67、血管内皮钙黏蛋白(vascularendothelial-cadherin,VE-cad)、 p120连环蛋白(p120-catenin, p120ctn)水平；构建野生型IGF1R重组质粒(pGL4-IGF1R-WT)和突变型IGF1R重组质粒(pGL4-IGF1R-MUT)，将HCAECs细胞分为mimic-NC+pGL4-IGF1R-WT组、 miR-125a-5pmimic+pGL4-IGF1R-WT组、 mimic-NC+pGL4-IGF1R-MUT组、 miR-125a-5pmimic+pGL4-IGF1R-MUT组，双荧光素酶报告实验测定miR-125a-5p与IGF1R mRNA的水平。结果：与对照组相比，20%川崎病血清组HCAECs细胞5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)结合率、miR-125a-5p水平、VE-cad、p120ctn表达均升高(均P<0.05),IGF1R mRNA与蛋白水平、HCAECs细胞光密度(optical density,OD)值、Ki-67均降低(均P<0.05)；与20%川崎病血清组相比，20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor组HCAECs细胞EdU结合率、miR-125a-5p水平、VE-cad、 p120ctn表达均降低，IGF1RmRNA水平与蛋白水平、 HCAECs细胞OD值、 Ki-67均升高(均P<0.05)；与20%川崎病血清+miR-125a-5pinhibitor组相比，20%川崎病血清+miR-125a-5pinhibitor+siIGF1R组HCAECs细胞EdU结合率miR-125a-5p水平、VE-cad、p120ctn表达均升高(均P<0.05),IGF1R mRNA与蛋白水平、HCAECs细胞OD值、 Ki-67均降低(均P<0.05)；与mimic-NC+pGL4-IGF1R-WT组对比，miR-125a-5pmimic+pGL4-IGF1R-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05)；与mimic-NC+pGL4-IGF1R-MUT组相比，miR-125a-5pmimic+pGL4-IGF1R-MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论：川崎病内皮细胞损伤模型中miR-125-5p呈高表达，IGF1R呈低表达，miR-125-5p下调可靶向上调IGF1R表达，促进细胞增殖、迁移。

• 单位
  郑州儿童医院; 郑州大学