牛病毒性腹泻病毒和牛冠状病毒双重纳米RT-PCR检测方法的建立及应用

作者：魏宇; 王海璐; 孙飞雁; 郭利; 程悦宁^*; 王全凯^*

来源：畜牧与兽医, 2022, 54(03): 101-105.

• 牛病毒腹泻病毒
• 牛冠状病毒
• 双重纳米RT-PCR

本文建立了一种同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛冠状病毒(BCoV)2种病原的双重纳米RT-PCR方法。采用BVDV 5′-UTR基因序列(GenBank登录号：AB040132.1)和BCoV的N基因保守序列(GenBank登录号：KX982264.1)设计出一对BVDV特异性引物和一对BCoV的特异性引物，结果表明此方法对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)和牛轮状病毒(BRV)均无交叉反应，特异性良好。同时，应用此方法检测33份腹泻牛的临床样品和25份腹泻鹿的临床样品，结果得出BVDV、BCoV和2种病原混合感染的牛样品阳性率分别为15.15%、36.36%和6.06%。鹿样品感染BVDV、BCoV和2种病原混合感染的阳性率分别为28%、8%和8%。此外，敏感性试验结果为常规RT-PCR敏感性的10倍，最低检出限为1 fg。研究表明，本文建立的该方法快速、灵敏、简捷，具有较强的特异性、敏感性，可适用于大批量临床样品检测，为反刍动物相关病毒性腹泻的诊断和防控提供一定技术支撑。

• 单位
  吉林农业大学; 中国农业科学院特产研究所