葡萄球菌肠毒素A真核表达质粒的构建及其在喉癌Hep-2细胞来源exosomes中的表达

作者：田涵斋; 吉晓滨; 谢景华; 刘启才

来源：中华生物医学工程杂志, 2017, 23(03): 183-188.

• 葡萄球菌肠毒素A
• 糖基化磷脂酰肌醇
• 转染
• exosomes
• 荧光定量实时PCR

目的构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)与糖基化磷脂酰肌醇(GPI)的真核表达质粒pmiRRB-REPORT-SEA-GPI并转染人喉癌细胞株Hep-2细胞,检测Hep-2细胞分泌的exosomes中SEA的表达。方法利用NOTI酶切原核生物质粒pGSI-SEA-GPI粘性末端,琼脂糖凝胶电泳分离、提纯目的基因SEA-GPI,利用T4连接酶连接真核表达质粒pmiR-RB-REPORT与SEA-GPI构建真核表达质粒pmiRRB-REPORT-SEA-GPI。脂质体法转染pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI至Hep-2细胞,荧光定量实时PCR(qRT-PCR)检测Hep-2细胞SEA-GPI mRNA的表达。提取Hep-2细胞分泌的exosomes,免疫印迹测定SEA在exosomes中的表达。结果琼脂糖凝胶电泳显示成功构建真核表达质粒pmiR-RB-REPORTSEA-GPI。qRT-PCR检测显示,pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI转染的Hep-2细胞SEA-GPI mRNA显著表达。免疫印迹显示Hep-2细胞分泌的exosomes中存在SEA蛋白表达。结论 SEA可能通过GPI结构锚定于exosomes膜上,为制备含有SEA-GPI锚定蛋白的SEA-eoxsomes瘤苗提供了依据。

• 单位
  广州医科大学; 广州市第一人民医院