DENV-2对HUVECs自噬小体形成和自噬体-溶酶体融合及溶酶体降解途径的影响

作者：胡盼; 苟小琴; 程瑶; 李志阳; 杨云巧; 何慧; 吴宁^*

来源：贵州医科大学学报, 2022, 47(11): 1274-1287.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2022.11.003

• 登革病毒
• 人脐静脉内皮细胞
• 自噬
• 溶酶体
• 自噬流

目的 探讨登革2型病毒(DENV-2)对原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬小体形成、自噬体-溶酶体融合及溶酶体降解途径的影响。方法 于DENV-2感染HUVECs 36 h时，采用透射电子显微镜观察HUVECs中自噬小体形成情况;于DENV-2感染HUVECs 12、24、36及48 h时，采用Western blot检测HUVECs中的微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达水平;于DENV-2感染2、4、6、8、10、12、18、24、30、36及4 8 h时，采用Western blot检测HUVECs中自噬选择性底物p62蛋白表达水平;于DENV-2感染后24、36及48 h，采用Western blot检测HUVECs中突触融合蛋白17(STX17)、突触体相关蛋白29(SNAP29)、囊泡相关膜蛋白8(VAMP8)的表达水平;采用溶酶体红色荧光探针(Lysotracker red)染色法观察DENV感染后HUVECs内溶酶体的p H变化; DENV-2感染HUVECs 24、36及48 h给予自噬抑制剂CQ处理或不处理的HUVECs中LC3-Ⅱ蛋白表达水平。结果 透射电子显微镜结果显示，DENV-2感染可诱导自噬小体的形成; Western blot结果显示，DENV感染后12、24、36及48 h时LC3-Ⅱ表达显著增高(P <0.05); p62表达水平在感染早中期无明显变化，30 h后显著增高(P <0.05),36 h到达峰值; DENV-2感染后各时间点STX17蛋白表达水平均降低(P <0.05);感染24 h时，SNAP29、VAMP8蛋白水平增高(P <0.05)，但随后36 h和4 8h蛋白表达均下降(P <0.05); Lysotracker red染色结果和Western blot结果显示DENV-2感染阻碍了溶酶体正常酸化。结论 DENV-2感染可激活HUVEC自噬，诱导自噬小体的形成，但DENV-2阻碍了自噬-溶酶体融合，抑制溶酶体正常酸化。

• 单位
  基础医学院; 贵州医科大学