牛匈爱病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立及应用

作者：朱鑫玥; 董覃婷; 罗宇航; 张广欣; 乔成鹏; 黄稳妃; 邹延林; 陈樱; 欧阳康; 韦祖樟; 苏亚权; 潘艳^*; 黄伟坚^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(10): 1252-1258.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0179

• hunnivirus
• SYBR GreenⅠ
• 实时荧光定量PCR
• 5′UTR
• 检测方法

水牛匈爱病毒(BufHuV)是2021年在广西水牛中新发现的一种小核糖核酸病毒，本研究旨在建立一种可用于临床快速且特异检测牛匈爱病毒的方法。基于GenBank上公布的bovine hunnivirus、ovine hunnivirus和BufHuV的5′UTR保守区设计了1对特异性引物，首次建立了检测牛匈爱病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果表明，标准曲线在1.1×108copies/μL～1.1×103copies/μL质粒标准品稀释浓度范围内呈线性关系，斜率为-3.265 7，相关系数为0.999 8，熔解曲线为单峰，检测下限为1.1×101copies/μL，比常规PCR敏感性高100倍；特异性高，与多种常见的牛病病毒均无交叉反应；重复性好，批内和批间变异系数均小于1.0%。收集了257份有腹泻迹象的牛粪样品，用于对所建立平台的性能评估，结果，建立的实时荧光定量PCR的阳性检出率为3.89%，高于普通PCR的阳性检出率(1.56%)。上述结果表明，该方法将为牛匈爱病毒的临床样品检测、流行病学监测提供一种快速、可靠、低成本的替代方案，也为后续研究奠定了基础。

• 单位
  广西农业职业技术学院; 广西大学