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摘要
目的 探讨左归降糖解郁方（ZGJTJYF）对糖尿病并发抑郁症（DD）大鼠海马神经元的保护作用及其机制。方法 （i）体内实验中,取60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为6组,每组10只：空白组、模型组、阳性药组（1.8 mg/kg氟西汀+0.18 g/kg二甲双胍）、高剂量ZGJTJYF组（ZGJTJYF-H,40.500 g/kg ZGJTJYF）、中剂量ZGJTJYF组（ZGJTJYF-M,20.250 g/kg ZGJTJYF）和低剂量ZGJTJYF组（ZGJTJYF-L,10.125 g/kg ZGJTJYF）。除空白组外,其余各组均予以高脂乳剂灌胃联合单次尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）及4周慢性不可预见性温和应激（CUMS）建立DD模型。所有给药组在CUMS造模期间分别经灌胃给予对应药物处理,空白组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。处理4周后,通过检测大鼠的血糖、血清中糖化血红蛋白含量判断ZGJTJYF的降糖效果；通过开野实验和Morris水迷宫测试评价ZGJTJYF的抗抑郁作用；采用高效液相色谱联合电化学检测器（HPLC-ECD）检测大鼠海马中5-羟色胺（5-HT）水平；采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测大鼠海马中色氨酸（TRP）、犬尿氨酸（KYN）及吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）的含量变化；采用免疫组织化学染色法（IHC）检测大鼠海马中突触素（SYN）、突触后致密物质95 (PSD-95)蛋白的表达水平；采用蛋白印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸受体（NR）2A和NR2B蛋白的表达水平。（ii）体外实验中,分别取5只SPF级SD孕鼠（E16–18）,6只SPF级SD新生鼠用于原代海马神经元（Ne）、星形胶质细胞（As）和小胶质细胞（MG）提取,构建Ne-As-MG共培养体系,并将其分为6组：空白组（PBS）、模型组[150 mmol/L葡萄糖+200μmol/L皮质酮（G&P）+PBS]、空白血清组（G&P+10%空白血清）、阳性药组（G&P+10%阳性药含药血清）、ZGJTJYF组（G&P+10%ZGJTJYF含药血清）和1-甲基-D-色氨酸组（1-MT,IDO阻断剂）（G&P+1-MT）,给予对应处理18 h后,采用免疫荧光法检测神经元突触相关蛋白SYN、PSD-95、NR2A和NR2B表达水平；采用ELISA法检测炎症因子白介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α及TRP/KYN代谢通路中相关因子[TRP、KYN、犬尿喹啉酸（KYNA）和喹啉酸（QUIN）]水平。结果 （i）体内研究结果表明,ZGJTJYF-M和ZGJTJYF-L可显著改善DD大鼠的血糖升高状态（P <0.01,P <0.05）,ZGJTJYF-H、ZGJTJYF-M和ZGJTJYF-L均显著增加其自主活动能力和学习记忆能力（P <0.01,P <0.01,P <0.05）；同时,ZGJTJYF-M可有效升高大鼠海马中5-HT和TRP水平（P <0.01）,降低KYN和IDO水平（P <0.01）,并能显著提高海马神经元中SYN和PSD-95的表达水平（P <0.01）,抑制海马内NR2A和NR2B异常活化（P <0.01）。（ii）体外研究结果表明,ZGJTJYF含药血清可显著提高海马神经元中SYN和PSD-95的表达水平（P <0.01）；有效降低IL-1β（P <0.01）、IL-6 (P <0.05)、TNF-α（P <0.01）、IDO(P <0.05)、KYN (P <0.05)和QUIN的水平（P <0.01）,升高TRP和KYNA的水平（P <0.01）；并对DD环境下神经元中的NR2A和NR2B异常活化具有显著的抑制作用（P <0.05）。结论 中药复方ZGJTJYF可通过抑制大鼠海马中IDO表达,调节TRP/KYN代谢途径,有效改善海马中的5-HT不足,对DD导致的海马神经元损伤具有良好的保护作用,是防治DD的有效潜在治疗药物。
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单位湖南中医药大学第一附属医院; 湖南中医药大学; 江西省药品监督管理局
