CRISPR/Cas9系统介导的EZH2基因定点敲入Hut78细胞系的构建

作者：鲁卓林; 熊显佳; 吴云丹; 周慧; 贾军; 王双林; 武莉莉; 刘艺洁; 乔阳; 杨冰; 赵秀娟; 王青松; 韩春勇; 张玲; 孙琰

来源：天津医药, 2017, 45(05): 449-453.

DOI：10.11958/20170336

• 甲基化
• EZH2基因
• CRISPR/Cas9n系统
• 基因编辑

目的利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。方法构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA(sg RNA)表达载体pSpCas9(BB)-2A-Puro-sg RNA,将两个载体共转染Hut78细胞,通过qPCR检测EZH2 mRNA的表达情况,通过Western Blot检测EZH2和H3K27me3蛋白的表达情况。结果测序结果显示,构建的pMD-18T-EZH2和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sg RNA表达载体插入序列完全正确。将构建的两个质粒共转染Hut78细胞,qPCR结果显示EZH2基因在RNA水平上表达显著上调;Western blot结果显示EZH2和H3K27me3蛋白表达水平显著提高。结论通过CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。

• 单位
  中国人民解放军第二五四医院; 基础医学院; 天津医科大学; 天津医院; 天津市儿童医院; 天津医科大学总医院