六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的影响

作者：王乐; 徐无忌

来源：中医正骨, 2016, 28(08): 1-7.

• 椎间盘退行性变
• 六味地黄丸
• 胶原Ⅰ型
• 胶原Ⅱ型
• 兔
• 动物实验

目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的影响。方法:将80只新西兰兔随机分为空白组、假手术组、模型组和六味地黄组,每组20只。模型组、六味地黄组手术暴露L45和L56椎间隙,随机选择1个椎间盘注射肿瘤坏死因子α进行椎间盘退变造模,并以咬骨钳咬除该椎间盘上位椎体横突进行标记;假手术组经相同手术入路暴露L45和L56椎间隙,不做任何处理后缝合;空白组不进行任何手术干预。造模术后3 d开始,六味地黄组按26 mg·kg-1以六味地黄胶囊混悬液灌胃,其余3组以等量生理盐水灌胃,每天1次,共8周。分别于药物干预开始后2、4、6、8周,从各组随机选取5只兔子处死,模型组和六味地黄组手术取出造模椎间盘,空白组和假手术组随机选择L45或L56椎间盘取出。分别采用聚合酶链式反应法和Western Blot法测定椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原的mRNA和蛋白表达水平。结果:药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅰ型胶原mRNA表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.064 8±0.009 8),(0.068 6±0.012 7),(0.192 0±0.040 6),(0.124 6±0.012 0),F=49.752,P=0.000;(0.066 0±0.010 0),(0.077 1±0.011 8),(0.252 4±0.039 9),(0.164 1±0.018 1),F=79.537,P=0.000;(0.071 2±0.011 2),(0.089 1±0.008 1),(0.326 3±0.028 5),(0.176 3±0.015 0),F=236.726,P=0.000;(0.094 1±0.012 0),(0.155 0±0.003 8),(0.451 4±0.039 6),(0.205 8±0.018 1),F=201.055,P=0.000];模型组Ⅰ型胶原mRNA表达水平高于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.000,P=0.015,P=0.002,P=0.000;P=0.013,P=0.002,P=0.000,P=0.015;P=0.002,P=0.012,P=0.000,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=50.563,P=0.132;F=80.352,P=0.634);模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=193.635,P=0.000;F=284.736,P=0.000),Ⅰ型胶原mRNA表达水平均逐渐增高(P=0.004,P=0.002,P=0.000;P=0.000,P=0.003,P=0.001)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅱ型胶原mRNA表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.042 7±0.008 0),(0.041 2±0.005 8),(0.011 6±0.002 1),(0.031 7±0.005 6),F=42.696,P=0.000;(0.038 8±0.004 3),(0.037 3±0.004 3),(0.011 5±0.001 8),(0.031 1±0.003 5),F=108.110,P=0.000;(0.030 3±0.005 7),(0.025 9±0.008 3),(0.007 9±0.002 7),(0.017 2±0.002 1),F=52.436,P=0.000;(0.029 3±0.006 9),(0.023 7±0.004 6),(0.005 3±0.001 0),(0.014 8±0.001 8),F=51.375,P=0.000];模型组Ⅱ型胶原mRNA表达水平低于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.002,P=0.001,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.002,P=0.013,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=70.463,P=0.122;F=90.362,P=0.089);模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=110.364,P=0.001;F=86.362,P=0.004),模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平均逐渐降低(P=0.002,P=0.005,P=0.003;P=0.000,P=0.001,P=0.000)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅰ型胶原蛋白表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.575 9±0.135 6),(0.599 5±0.037 4),(0.620 0±0.072 0),(0.609 6±0.032 1),F=9.288,P=0.001;(0.593 9±0.108 0),(0.647 1±0.044 8),(0.807 0±0.061 6),(0.659 9±0.105 5),F=28.883,P=0.000;(0.614 0±0.224 6),(0.685 6±0.066 5),(1.129 1±0.097 4),(0.700 1±0.086 5),F=34.957,P=0.000;(0.614 8±0.139 3),(0.742 3±0.165 3),(1.322 4±0.351 7),(0.806 0±0.094 3),F=3.296,P=0.048];模型组Ⅰ型胶原蛋白表达水平高于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.000,P=0.015,P=0.002,P=0.000;P=0.013,P=0.002,P=0.000,P=0.015;P=0.002,P=0.012,P=0.000,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=37.485,P=0.365;F=10.376,P=0.583);模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=70.362,P=0.000;F=6.375,P=0.001),模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平均逐渐增高(P=0.005,P=0.002,P=0.000;P=0.004,P=0.001,P=0.000)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅱ型胶原蛋白表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.605 8±0.066 5),(0.550 0±0.117 9),(0.278 0±0.053 2),(0.498 6±0.149 1),F=10.224,P=0.001;(0.553 7±0.126 5),(0.523 4±0.078 4),(0.258 2±0.037 8),(0.479 7±0.090 8),F=11.627,P=0.000;(0.546 8±0.120 8),(0.494 8±0.139 8),(0.219 0±0.099 2),(0.440 5±0.052 7),F=13.543,P=0.003;(0.494 8±0.042 5),(0.433 7±0.061 9),(0.131 9±0.012 8),(0.392 9±0.107 0),F=13.979,P=0.000];模型组Ⅱ型胶原蛋白表达水平低于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.002,P=0.001,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.002,P=0.013,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=17.364,P=0.092;F=15.573,P=0.175);模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=17.753,P=0.001;F=13.674,P=0.000),模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平均逐渐降低(P=0.002,P=0.004,P=0.001;P=0.000,P=0.001,P=0.000)。结论:六味地黄丸能适度下调兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ型胶原的表达、上调Ⅱ型胶原的表达,可在一定程度上延缓椎间盘退变进程。

• 单位
  湖南中医药大学第二附属医院