金黄色葡萄球菌α-溶血素的表达、纯化及中和性抗体的制备

作者：李迪; 高亚萍; 靳鹏; 董洁; 刘玉; 杨光

来源：军事医学, 2014, 38(11): 871-874+884.

• 葡萄球菌
• 金黄色
• α-溶血素
• 溶血活性
• 抗体
• 红细胞

目的利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌(SAU)重要的外分泌毒力因子α-溶血素(alpha hemolysin,Hla),检测Hla蛋白对不同种属红细胞的裂解作用;制备其特异性抗体,并检测抗体的中和活性。方法以SAU NCTC-8325菌株基因组为模板,PCR扩增hla基因,构建重组表达载体p ET-28a-Hla,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过Ni2+柱亲和纯化获得Hla蛋白;通过红细胞裂解实验测定Hla蛋白的溶血活性。结果重组Hla蛋白以可溶形式表达,细胞裂解实验表明,纯化的Hla蛋白可以显著裂解兔红细胞,但人红细胞和羊红细胞对Hla杀伤作用不敏感。ELISA结果表明,获得了效价较高的多克隆抗体。该抗体可以有效抑制Hla对兔红细胞的裂解作用。结论 SAU的Hla蛋白对不同种属红细胞的溶解能力不同,为探讨Hla裂解细胞的机制给予一定的提示;同时所制备的特异性抗体(anti-Hla)可以抑制Hla的溶血作用,为深入研究Hla的致病机制奠定了基础。

• 单位
  广西医科大学; 军事医学科学院基础医学研究所; 基础医学院