牛乳中蜡样芽孢杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及验证

作者：杨健; 侯婷婷; 佐兆杭; 郭瑜; 姚笛^*

来源：中国生物制品学杂志, 2019, 32(03): 324-327+332.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.002520

• 荧光定量PCR
• 蜡样芽孢杆菌
• gyrB基因 Fluorescence quantitative PCR
• Bacillus cereus
• gyrB gene

目的建立一种快速检测牛乳中蜡样芽孢杆菌的荧光定量PCR方法,并进行验证。方法根据GenBank中登录的蜡样芽孢杆菌gyrB基因序列及荧光定量PCR要求,设计合适的特异性引物,提取菌体DNA,对目的基因进行扩增及克隆;以重组质粒为模板进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线;以蜡样芽孢杆菌DNA为模板进行荧光定量PCR扩增,确定其扩增条件。对建立的方法进行特异性及灵敏性验证。结果建立的方法检测其他3种牛乳中常见致病菌(大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌)未见特异性扩增,即无交叉反应;最低检出限为1×10~(-7) ng/μL。以掺入蜡样芽孢杆菌的牛乳为样品,可检测到牛乳中10. 4 CFU/mL的蜡样芽孢杆...

• 单位
  黑龙江八一农垦大学